Técnicas de Inmunodiagnóstico

Objetivo Obtener leucocitos a partir de sangre total mediante la técnica de Ficoll. Fundamento La técnica más habitual para obtener preparaciones de linfocitos de sangre periférica purificadas o enriquecidas, necesarias para realizar pruebas in vitro, es la separación de linfocitos por centrifugación en gradiente de Ficoll. La sangre total desfibrinada se diluye en medio de cultivo y se vierte sobre un tubo lleno hasta la mitad de un medio con Ficoll. Seguidamente se centrifuga y se consigue la separación de los linfocitos. Aunque esta técnica separa los leucocitos mononucleares, incluyendo tanto linfocitos como monocitos, cuando las muestras proceden de sangre periférica, son mucho más abundantes los linfocitos. Fuente :  Cuéllar del Hoyo, Carmen. Gómez Barrio, Alicia (2016). Técnicas de Inmunodiagnóstico. Editorial Altamar. ISBN: 8416415269 Materiales y reactivos Sangre con EDTA, SSF, 2 tubos de 10mL estériles, micropipeta 1000μL, Ficoll, centrífuga, pipeta p

Objetivo Determinar la presencia de la hormona Gonadotropina Coriónica en la orina. Fundamento Es una prueba rápida de aglutinación en porta para la detección directa de la hormona Gonadotropina Coriónica humana (hGC) en orina. La determinación se efectúa ensayando una suspensión de partículas de látex recubiertas con anticuerpos monoclonales antihGG, frente a las muestras problema. Fuente :  Cromatest. Linear Chemicals, S.L.  hGC-Latex . ISO: 9001. ISO: 13485. ( http://www.linear.es/ficheros/archivos/2610015%20cas%20Rev.%2001.pdf ) Materiales y reactivos Kit de hGC-Latex, pipeta pasteur de vidrio y una muestras de orina. Procedimiento 1.- Sacar el kit de la nevera y atemperarlo. 2.- Depositar una gota de orina en uno de los círculos de la tarjeta. 3.- Depositar una gota de control positivo en el siguiente círculo. 4.- Depositar una gota de control negativo en el siguiente círculo. 5.- Añadir una gota de reactivo a cada una de las gotas anteriores y

Objetivo Comprobar la presencia de la bacteria Chlamydia trachomatis  en la orina de dos compañeras. Fundamento Es una prueba de inmunoensayo de flujo lateral cualitativa en muestras cervicales femeninas y muestras uretrales o de orina masculinas. En esta prueba el anticuerpo específico del antígeno de Chlamydia está cubierto en la región de la banda de la prueba. Durante la prueba, la solución extraída del antígeno reacciona con un anticuerpo a Chlamydia que está recubierto con partículas. La mezcla migra hacia arriba para reaccionar con el anticuerpo a  Chlamydia en la membrana Fuente :  Cromatest. Linear Chemicals, S.L. Chlamydia Cassette . ISO: 9001. ISO: 13485. ( https://www.linear.es/wp-content/uploads/2018/03/4240220-Chlamydia-cassette-20t-cas.pdf ) Materiales y reactivos Kit de Chlamydia Cassette y 2 muestras de orina. Procedimiento 1.- Sacar el kit de la nevera y atemperarlo. 2.- Mientras se atempera, en un tubo de 10mL añadimos 4mL de orina

Objetivo Comprobar la presencia de THC en la orina de tres compañeras. Fundamento Es un inmunoensayo cromatográfico rápido basado en el principio de uniones competitivas. La droga que puede estar presente en la muestra de orina compite frente al conjugado de la misma en los puntos de unión al anticuerpo. Fuente :  Cromatest. Linear Chemicals, S.L. THC Marijuana Cassette . ISO: 9001. ISO: 13485. ( https://linear.es/ficheros/archivos/4465240_Marijuana_cassette_40t_cas.pdf ) Materiales y reactivos Kit de THC Marijuana Cassette y 3 muestras de orina. Procedimiento 1.- Sacar el kit de la nevera y atemperarlo. 2.- Con la pipeta que proporciona el kit, verter 3 gotas de orina en el pocillo correspondiente. 3.- Esperar unos segundos y comprobar los resultados. Resultados - Negativo : aparecen dos líneas, una en la zona del control (C) y otra en la zona de la prueba (T). Este resultado indica que la concentración de marihuana está por debajo del nivel detec

Objetivo Observar las líneas de precipitación que se forman dependiendo del suero que se eche en cada pocillo. Fundamento En la técnica de doble difusión o reacción de Ouchterlony, los dos componentes de la reacción (antígeno y anticuerpo) difunden libremente por el gel. A medida que los dos componentes de la reacción van difundiendo libremente por el agar, se irá formando un gradiente de concentraciones. En el espacio entre dos pocillos habrá una determinada zona en la que los reactivos se encuentren en su relación de equivalencia, y es ahí donde se formará un precipitado que sobre el gel se detectará como una banda blanca visible a simple vista. Cuanto menor sea la concentración del anticuerpo que difunde por el gel, menor será la distancia que tiene que recorrer hasta encontrar la concentración equivalente (punto de equivalencia) del antígeno. Fuente :  Cuéllar del Hoyo, Carmen. Gómez Barrio, Alicia (2016).  Técnicas de Inmunodiagnóstico . Editorial Altamar. ISBN: 8416

Objetivo Determinar la presencia del factor reumatoide en el suero problema observando la aglutinación que se produce en la tarjeta al añadirle el reactivo. Fundamento Una de las técnicas de aglutinación indirecta que más se usan es la aglutinación de látex en placa. La reacción positiva se evidencia por la aparición de un moteado característico, ausente en la reacción negativa. Normalmente, la técnica es cualitativa con resultado positivo o negativo, pero puede convertirse en semicuantitativa si se lleva a cabo con diluciones seriadas de un suero. Fuente :  Cuéllar del Hoyo, Carmen. Gómez Barrio, Alicia (2016). Técnicas de Inmunodiagnóstico . Editorial Altamar. ISBN: 8416415269 Materiales y reactivos Tarjeta, reactivo RF-látex, suero problema (Juan, 03/10/2019), micropipeta de 50µL y puntas amarillas. Procedimiento 1.- Coger 50µL del suero problema y dispensarlos en uno de los círculos de la tarjeta. 2.- Añadir una gota de RF-látex a la gota de suero.

Objetivo Comprobar el funcionamiento de los reactivos y el grupo sanguíneo de dos compañeras. Fundamento La técnica de hemaglutinación directa es u n tipo especial de aglutinación directa. Esta técnica se aplica a la determinación de grupos sanguíneos del sistema ABO y Rh.  Aunque se conocen más de cien antígenos de membrana del eritrocito, no todos desencadenan reacciones de transfusión tan severas como los antígenos mencionados (ABO y Rh). Fuente :  Cuéllar del Hoyo, Carmen. Gómez Barrio, Alicia (2016).  Técnicas de Inmunodiagnóstico . Editorial Altamar. ISBN: 8416415269 Materiales y reactivos Reactivos anti-A, anti-B y anti-AB, lanceta automática, portaobjetos, alcohol y algodón. Procedimiento 1.- Limpiar el dedo con alcohol y pichar con la lanceta automática. 2.- Depositar 3 gotas en el portaobjetos, cada una para un reactivo.           * Incidencia : a Luisa le salía muy poca sangre, por lo que solo pudimos obtener una gota. 3.- Echar una g

Objetivo Comprobar la existencia de antígenos de la Hepatitis B en una muestra de suero. Fundamento La membrana del cassette está recubierta por anticuerpos anti-HBsAg en la región de la banda de la prueba. Durante el ensayo, la muestra reacciona con la partícula recubierta con anticuerpos anti-HBsAg. La mezcla migra a lo largo de la membrana cromatográficamente por acción capilar para reaccionar con los anticuerpos anti-HBsAg de la membrana generando una línea de color. La presencia de esta línea de color en la región de la banda del Test indica un resultado positivo, mientras que su ausencia indica un resultado negativo. La aparición de una banda coloreada en la región de Control sirve como procedimiento de control. La aparición de esta línea se utiliza para verificar que se ha añadido el volumen de muestra suficiente, que el flujo ha sido apropiado. Fuente :  Chromatest. Linear Chemicals, S.L. HBsAg Cassette . ISO: 9001. ISO: 13485. ( https://linear.es/ficheros/archivo

Objetivo Medición del diámetro del suero disperso en cada pocillo. Fundamento Esta técnica se basa en la difusión libre de uno de los componentes de la reacción por un gel que lleva incorporado el otro componente. La formación de los inmunocomplejos da lugar a anillos de precipitación cuyo diámetro es proporcional a la concentración del que difunde por el gel. Fuente :  Cuéllar del Hoyo, Carmen. Gómez Barrio, Alicia (2016).  Técnicas de Inmunodiagnóstico . Editorial Altamar. ISBN: 8416415269 Materiales y reactivos Placa, 3 sueros diferentes y micropipeta. Procedimiento 1.- Sacar la placa de la nevera para atemperarla. 2.- En cada pocillo, pipetear 1µL de cada suero. 3.- Cerrar la placa y dejarla a temperatura ambiente. 4.- Esperar 72-96h y comprobar los resultados. Resultados Suero 1 -> Germa Suero 2 -> Sofía Suero 3 -> Juan Diámetro de los pocillos en milímetros                                                              

Objetivo Comprobar si los hematíes se lisan usando agua destilada vs. suero fisiológico. Fundamento El efecto osmótico es verificado por "plasmólisis". La concentración de solutos es mayor en el interior de la célula que en el agua destilada, por lo que esta entra en la célula para igualar ambas soluciones, provocando que la célula se hinche hasta el punto en que explota. Esto no ocurre con el suero fisiológico, ya que la cantidad de solutos que contiene es igual la cantidad de solutos que  hay en el interior de la célula. Fuente :  López, Ana. Cómo entran y salen las sustancias de la célula . UTN.BA ( http://www.sceu.frba.utn.edu.ar/dav/archivo/homovidens/lopez.ana/final%20Ana%20Lopez/trabajo%20final/osmosis.html ) Materiales y reactivos Tubos falcon 15mL, sangre obtenida en la Práctica 1 , agua destilada, suero fisiológico y centrífuga. Procedimiento 1.- En un tubo falcon 15mL, introducir un poco de sangre y mezclarla con agua destilada

Objetivo Separar el suero del resto de componentes de la sangre extraída en la Práctica 1 . Fundamento Esta práctica se basa en la obtención de suero mediante centrifugación debido a la coagulación de la sangre una vez extraída del organismo. Materiales y reactivos Tubo amarillo (sin anticoagulante) con sangre, pipeta pasteur, tubos eppendorf 1.5mL, pinza y microcentrífuga. Procedimiento 1.- Dejar reposar los tubos durante 30min para que la sangre se coagule.           * Incidencia : pasados los 30min, la sangre aún no se había coagulado, por lo que tuvimos que esperar más de 1           hora hasta que se produjo la coagulación. 2.- Una vez coagulada la sangre, extraer el suero con una pipeta pasteur y verterlo en un tubo eppendorf de 1.5mL. 3.- Con una pinza, retirar el coágulo del tubo y depositarlo en un vaso de precipitado. 4.- Colocar los tubos eppendorf en la microcentrífuga y centrifugarlos durante 15min a 1500 x g. Resultados  

Objetivo Obtener sangre suficiente para poder realizar la Práctica 2 . Fundamento Este procedimiento debe realizarlo siempre un facultativo. Se basa en la extracción de sangre mediante aguja y jeringa, aunque esta técnica ya está en desuso. Fuente : Valladares, Carolina. Vídeo explicativo . (Dropbox:  https://www.dropbox.com/s/syk0idxkt0uu258/extraccion%20de%20sangre.mp4?dl=0 ) Materiales y reactivos Ligadura, algodón, alcohol 96º, aguja, jeringa y tubo amarillo (sin anticoagulante). Procedimiento 1.- Aplicar el torniquete. 2.- Palpar la vena. 3.- Ensamblar la aguja con la jeringa. 4.- Limpiar la zona donde se va a realizar la punción. 5.- Punzar la vena; sabemos que la aguja ha entrado en la vena porque se llena un poco el cono. 6.- Tirar del émbolo hacia atrás hasta llenar la jeringa. 7.- Sacar la aguja y colocar un algodón sobre el lugar de la punción, haciendo presión.