Práctica 8: Precipitación en agar doble difusión (Reacción de Ouchterlony)

Objetivo

Observar las líneas de precipitación que se forman dependiendo del suero que se eche en cada pocillo.

Fundamento

En la técnica de doble difusión o reacción de Ouchterlony, los dos componentes de la reacción (antígeno y anticuerpo) difunden libremente por el gel. A medida que los dos componentes de la reacción van difundiendo libremente por el agar, se irá formando un gradiente de concentraciones.

En el espacio entre dos pocillos habrá una determinada zona en la que los reactivos se encuentren en su relación de equivalencia, y es ahí donde se formará un precipitado que sobre el gel se detectará como una banda blanca visible a simple vista. Cuanto menor sea la concentración del anticuerpo que difunde por el gel, menor será la distancia que tiene que recorrer hasta encontrar la concentración equivalente (punto de equivalencia) del antígeno.

Fuente: Cuéllar del Hoyo, Carmen. Gómez Barrio, Alicia (2016). Técnicas de Inmunodiagnóstico. Editorial Altamar. ISBN: 8416415269

Materiales y reactivos

Placas de Petri, agarosa, agua destilada, microondas, pipetas pasteur, 3 sueros diferentes y antisuero anti-IgG.

Procedimiento

1.- Realizar placas de agarosa al 1%.

2.- Excavar pocillos equidistantes en la placa, estando uno en el centro y 6 alrededor.

3.- Verter dos gotas del anti-suero anti-Ig en el pocillo central.

4.- En los pocillos 1 y 4 vertemos 10μL de suero de Juan.

5.- En los pocillos 2 y 5 vertemos 10μL de suero de Sofía

6.- En los pocillos 3 y 6 vertemos 10μL de suero de Germán.

7.- Incubar las placas durante 48h a 36ºC.

8.- Pasado ese tiempo, sacar las placas y observamos los resultados.

Resultados
No se ha producido ninguna reacción, cuando deberíamos haber observado una migración radial del antisuero y los sueros. Nuestra sospecha es que esto ha ocurrido porque el suero utilizado es de hace 3 semanas.

                    

Foto: Mari Carmen Serrano                                   Foto: Mari Carmen Serrano

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